一、基因表達qPCR定量分析

說明

可根據實驗目的，客製化設計實驗方案（相對定量，絶對定量；SYBR Green 染料法或 Taqman 探針法）。

技術服務項目

1.相對定量

基因表達的研究一般採用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和參比基因同時分別進行定量，然後求出對於參比基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的 mRNA 進行表達量分析。內控基因通常選用表達量相對恆定的 Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin 等。通過同時對參比基因的實時檢測，可以對樣品之間由於起始細胞數不同、或 RNA 純化效率的不同等造成的 RNA 量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的 mRNA 表達量進行分析之目的。

2.絶對定量

絶對定量需要構建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，使用已知濃度（拷貝數）的標準品製作標準曲線後，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行絶對量或者起始拷貝數的分析。

實驗流程


報告內容

送檢服務注意事項

1. 所需樣品種類：細胞株，動物組織類，植物組織類等。
2. 樣品須為非感染性生物。
3. 為了避免樣本 RNA degradation，可採下列方式處理檢體：

          (1)1份樣本體積與 4 份 RNA Keeper Tissue Stabilizer 均質混合，可穩定保存於4度C一周內。
                     (2)血液樣本以 3 倍體積加入 RBC Lysis Buffer。



二、 DNA SNP Genotyping 基因分型-TaqMan QPCR SNP Genotyping

SNP / 單核苷酸多態性分析

說明

SNP（Single Nucleotide Polymorphism），即單核苷酸多態性，是由於單個核苷酸改變而導致的核酸序列多態。一般來說，一個 SNP 位點只有兩種等位基因，因此又叫雙等位基因。SNP 在人類基因組中的發生頻率比較高，大約平均每 1,000 個鹼基中就有一個多態位點。有些 SNP 位點還會影響基因的功能，導致生物性狀改變甚至致病。單核苷酸多態性是研究人類家族和動植物品系遺傳變異的重要依據，因此被廣泛用於群體遺傳學研究（如生物的起源、進化及遷移等方面）和疾病相關基因的研究，在藥物基因組學、診斷學和生物醫學研究中起重要作用。

原理

每個 SNP 位點設計一對 Taqman 探針，分別標記不同的螢光。5 ' 末端帶有報告螢光基團，3 ' 端標有螢光淬滅基團，Taq 聚合酶具有外切活性，從而將探針5 ’ 端連接的螢光分子從探針上切割下來，破壞兩螢光分子間的 PRET，發出螢光。

報告內容 

送檢服務注意事項

1. 所需樣品種類：細胞株，動物組織類，植物組織類等。
2. 樣品須為非感染性生物。
3. 為了避免樣本 RNA degradation，可採下列方式處理檢體：

          (1)1份樣本體積與 4 份 RNA Keeper Tissue Stabilizer 均質混合，可穩定保存於4 度 C一周內。
                    (2)血液樣本以 3 倍體積加入 RBC Lysis Buffer。

可提供下列資料：

n  SNP ID：例如 rs12508358 或者欲區別的 DNA 區段與變異點。

n  樣本物種 例如人類、雞、羊等。


三、微小核酸 miRNA qPCR定量分析

miRNA Expression qPCR Analysis

說明

1. microRNA 為 19-22nt 的短的非编碼 RNA。
2. 與mRNA 的 3'-UTR 區域結合，進而在轉錄後調控 mRNA 的表達。
3. 在不同物種中，miRNA 序列具有高度的保守性（Conserved），具有組織特異性。
4.  microRNA 的表達改變與目前各種已知疾病相關。

原理

1. 採用廣泛認可的 Stem-loop 法，其包含 miRNA 特異的反轉錄引物，以及 qPCR 正、反向引子。環狀結構的 miRNA 特異反轉錄引物可特異性的轉錄 mature miRNA。再利用高度特異的正反向引子，使 miRNA定量既靈敏又具高度特異。
2. 提供 miRNA spike-in，以監控 miRNA 純化過程是否有較大損失和反轉錄與定量PCR是否有 PCR 抑制劑。

實驗範例